ABC-Kits (Avidin/Biotin-Komplex)

Das Prinzip der ABC-Detektionskits beruht auf der Affinität von Avidin (oder Streptavidin) für Biotin. Die Abkürzung ABC steht für Avidin / Biotin-Komplex.
Avidin ist ein basisches Glykoprotein mit 68 kDa, das im Eiklar sowie in Geweben von Vögeln, Reptilien und Amphibien vorkommt. Avidin hat eine starke Affinität für Biotin, ein lösliches Vitamin von 34 kDa. Biotin kann an eine Vielzahl biologischer Moleküle wie z. B. Antikörper gekoppelt werden, und es können mehrere Biotinmoleküle an ein Protein gebunden werden. Das biotinylierte Protein kann dann an mehr als ein Avidin-Molekül binden. Ein Nachteil von Avidin ist die unspezifische Bindung an negativ geladene Strukturen wie den Kern der Zellen. Durch die Verwendung von Streptavidin wird diese unspezifische Bindung stark reduziert.
Streptavidin wird aus Streptomyces avidinii isoliert und ist in Größe und Affinität dem Avidin-Biotin ähnlich. Im Gegensatz zu Avidin ist Streptavidin jedoch nicht glykosyliert, wodurch Proteine bei immunhistochemischen Anwendungen weniger anfällig für unspezifische Bindungen sind.
Im Allgemeinen bestehen die ABC-Detektionskits aus:
- Einem biotinylierten sekundären Antikörper
- einem Avidin/Enzym-Komplex
Je nach Format können die Kits auch Blockierungs- und Verdünnungspuffer sowie das Substrat enthalten.