Herstellung von Llama-Monoklonalen
Aufbau einer Lama-VHH-Antikörperbibliothek mit einer Domäne und Screening-Dienstleistungen
Unsere optimierten Bibliotheksaufbau- und Screening-Prozesse mit Phage-Display-Technologie garantieren die erfolgreiche Isolierung von hochaffinen VHH-Klonen in kurzer Zeit.
Vorteile der Lama VHH Single-Domain-Antikörper:
- VHH Single-Domain-Antikörper haben eine Größe von nur 15 kD, verglichen mit etwa 150 kD bei typischen Immunglobulinen
- Die geringere Größe von Single-Domain-Antikörpern ermöglicht es ihnen, in Epitope einzudringen, die für herkömmliche Antikörper normalerweise nicht zugänglich sind, einschließlich der aktiven Stelle vieler Enzyme.
- Aufgrund ihrer geringeren Größe können sie auch schneller in Gewebe eindringen und sogar die Blut-Hirn-Schranke überwinden.
- VHH-Antikörper sind extrem stabil und widerstandsfähig gegen starke Säure und hohe Temperaturen; sie sind sogar in der Lage, sich nach einer Denaturierung wieder zu einem funktionellen Protein zu falten.
- Single-Domain-Antikörper haben aufgrund ihrer erhöhten Hydrophobizität eine sehr hohe Löslichkeit
- Die geringe Größe und Stabilität machen die VHH-Antikörper zu idealen Kandidaten für therapeutische und diagnostische Anwendungen.
Einzelheiten zur Herstellung von VHH-Antikörpern mit einer Domäne:
- Lama-Immunisierung
- Konstruktion von Phagen-Display-Bibliotheken: Wir überwachen den Antiserum-Titer mittels ELISA und sammeln während der gesamten Immunisierung mehrere Produktionsblutungen und PBMC-Zellen. Die PBMC-Zellen werden zu verschiedenen Zeitpunkten in RNA-Lysepuffer aufbewahrt, so dass die Antikörperrepertoires während des Immunisierungsprozesses erhalten bleiben. Am Ende des Immunisierungsprotokolls kann der Kunde die PBMC-Zellen zu jedem beliebigen Entnahmezeitpunkt auswählen, um die Bibliothek zu erstellen.
- Screening der VHH-Bibliothek und Bestimmung der Affinität: Die erstellte Bibliothek wird durch mehrere Runden der Affinitätsbindung/Selektion mit Antigen gescreent. Positive Klone werden durch ELISA identifiziert. Die Gene dieser positiven Klone werden einer Sequenzanalyse unterzogen. Die Affinität der einzelnen Binder wird durch ELISA bestimmt. Je nach Komplexität des Antigens werden ein bis drei Klone mit der besten Affinität geliefert.
- Reinigung von VHH-Antikörpern in großem Maßstab: Für jeden positiven Klon liefern wir ~100ug gereinigtes Protein ohne Aufpreis. Zusätzliche Antikörperproteine sind gegen Aufpreis erhältlich.
- Naive VHH-Phagendisplay-Bibliothek: Unsere neueste VHH-Bibliothek von nicht immunisierten Lamas umfasst ein großes und vielfältiges VHH-Repertoire, das über 2,0x109 periphere mononukleäre Zellen von 20 nicht immunisierten Lamas repräsentiert. Die Bibliothek enthält über 2x109 unabhängige Klone.