Interferon Alpha-2A

Interferon Alpha-2a (INF Alpha-2a) ist ein Interferon vom Typ 1, das aus 165 Aminosäureresten besteht und ein therapeutisches Protein mittlerer Größe ist, das traditionell durch rekombinante Technologie hergestellt wird. Dieses Zytokin wird wegen seiner antiviralen und antineoplastischen Eigenschaften intensiv genutzt.

1. Chemische Proteinsynthese

Die Chemie bietet unendlich viele Möglichkeiten zur Herstellung maßgeschneiderter Proteine. Unsere Technologie ermöglicht es, Moleküle Atom für Atom aufzubauen, und es können präzise Produktanpassungen berücksichtigt werden. Darüber hinaus stehen Ihnen unsere Mitarbeiter mit mehr als 20 Jahren Erfahrung zur Seite, um die besten Entscheidungen zu treffen.

 

• Unsere Synthese

Dank unserer einzigartigen und firmeneigenen Technologie haben wir die Grenzen der chemischen Peptidsynthese immer weiter hinausgeschoben. Wir können jetzt mittelgroße Proteine mit 70 bis 400 Aminosäuren herstellen.

 

• CO-Entwicklung

Wir arbeiten von Anfang an eng mit unseren Partnern zusammen, indem wir vollständig aktive Leitstrukturen für die präklinische Entwicklung und darüber hinaus konzipieren, anpassen und optimieren.

 

• Bio-Betriebe

Dank der sich weiterentwickelnden Vorschriften und unserer fortschrittlichen Technologie können wir jetzt über Biosimilar-Arzneimittel nachdenken, die frei von Endotoxinen und anderen Verunreinigungen aus der rDNA-Produktion sind, d. h. "saubere" Biosimilars oder "Biobetters".

 

Unsere chemische Syntheseplattform zielt darauf ab, mittelgroße Proteine mit höchster Reinheit und Homogenität im Milligramm-Maßstab von der frühen F&E-Phase bis zur industriellen Voll-GMP-Produktion im Multi-Gramm-Maßstab zu liefern.

 

Auf der Grundlage der bekannten Ligations-Technologie haben wir eigene Verfahren und Linker entwickelt, die es ermöglichen, peptidische Fragmente sehr spezifisch, Block für Block, zusammenzusetzen.

Wir können nicht nur native Proteine herstellen, sondern auch präzise modifizierte Proteine. Eine große Anzahl von Modifikationen ist mit unseren Fähigkeiten und Technologien kompatibel:

• Phosphorylierung / Glykosylierung / PEGylierung
• Markierung (Fluorophore, Biotin, Quenchers)
• Unnatürliche Aminosäuren (D-Aminosäuren, Isotopenmarkierung N15 und C13...)
• Fusionsproteine, zyklische Proteine

 

Indem wir diese maßgeschneiderten Proteine Atom für Atom aufbauen, können wir die Lokalisierung aller Veränderungen mit absoluter Präzision gewährleisten. Chemisch synthetisierte Proteine sind von Natur aus von sehr hoher Qualität und Reinheit. Sie enthalten keine Isoformen, keine Endotoxine und keine biologischen Verunreinigungen.

Schematische Synthesestrategie:

Synthese von linearen Proteinfragmenten

• Verwendung der Festphasen-Peptidsynthese (SPPS) Strategie
• Reinigung der Fragmente mittels RP-HPLC

Versammlung der Fragmente

• Montage von linearen Peptiden mit Hilfe unserer firmeneigenen Technologie
• Ein-Topf-Reaktion ohne zwischengeschaltete Aufreinigung
• Reinigung von linearem Protein mittels RP-HPLC

 

Vorteile der chemischen Proteinsynthese:

• Proteine mit maximaler biologischer Aktivität
• Kann die Probleme bei der Herstellung biologischer Proteine umgehen (Toxizität, Reinheit, Einschlusskörper...)
• Kann bei komplexen Proteinen helfen, die von biologischen Systemen nicht hergestellt werden können (hohe Hydrophobizität, intermenbrane Schleife)
• Sehr hohe Reinheit (endotoxin-, tier- und biologiefrei)
• Homogenität der Zubereitungen (keine Isoform)
• Für Proteine, die unnatürliche Aminosäuren oder fein kontrollierte Seitenketten benötigen
• Automatisierte Produktion im Milligrammbereich und Scale-up auf industriellen Maßstab

2. INF Alpha-2a chemische Synthese

• Strategie für die Montage

Um eine optimale Ausbeute und Reinheit zu gewährleisten, haben wir eine 3-Fragmente-Assembly-Strategie angewandt. Die Fragmente wurden durch klassische Festphasen-Peptidsynthese mit unserem firmeneigenen Harz synthetisiert und mit RP-HPLC gereinigt.

Der Zusammenbau des linearen Proteins erfolgte mit unserer firmeneigenen Technologie in einer Eintopfreaktion ohne zwischengeschaltete Reinigung. Die Aufreinigung des linearen Proteins erfolgte mittels RP-HPLC

 

• Halbkontrollierte Faltung

Der Zusammenbau Durch Modifikation der Proteinsequenz haben wir eine hocheffiziente Faltung in Lösung durchgeführt, die zu hohen Ausbeuten führte. Nach Abschluss der Faltung erfolgte die Freisetzung des nativ gefalteten Proteins durch In-situ-Behandlung. Die abschließende Reinigung des Proteins erfolgte durch PR-HPLC- oder HIC-Methoden

 

• Abschließende Charakterisierung

Um die optimale Reinheit und korrekte Struktur von Interferon Alpha-2A zu gewährleisten, haben wir dieses mittelgroße Protein mit den von uns entwickelten, äußerst zuverlässigen chromatographischen und massenspektrometrischen Methoden analysiert.

Durch strenge QA/QC konnte eine Reinheit von über 95 % des endgültigen Interferon Alpha-2A erreicht werden.

 

• Strukturelle Charakterisierung

Interferon Alpha-2A hat bekanntermaßen 2 Disulfidbindungen: Cys1-Cys98 und Cys29-Cys138. Wir haben die richtigen Cysteine durch enzymatischen Verdau (Trypsin) und UHPLC/Massenspektrometrie-Analyse der resultierenden Fragmente nachgewiesen.

 

 

• Analyse von IFN Aplpha-2A mittels LC-MS

IFN Aplpha-2A wurde enzymatisch abgespalten

Die Fragmente wurden bestimmt und die korrekten Disulfidbindungen wurden bestätigt.

 

• Identifizierung von verknüpften Peptidfragmenten