Producción de policlonales de ratón tras inmunización genética
Esta técnica permite hacer que el ratón exprese in vivo el gen que codifica el antígeno de interés.
=> Solicitud de presupuesto
El plásmido que contiene el gen se inyecta directamente en ratones que así expresarán el antígeno interesado in vivo. Le plasmide contenant le gène d'intérêt est directement injecté chez l'animal qui va ensuite exprimer la protéine in vivo.
Entre las células transfectadas, las células presentadoras de antígeno (APC) mostrarán las moléculas enfocadas a los actores de la respuesta inmunitaria a través del CMH.
Una parte de estos actores, las células B, producirán anticuerpos específicos.
Protocolo estándar :
- Construcción del plásmido del vector de expresión de ADN con un promotor CMV y potenciadores que contienen el ORF del antígeno.
- Transfección de células HEK293 con ADN plasmídico y preparación del extracto de antígeno
- Inyección del ADN plasmídico en ratones 3 veces
- Sangrado de los ratones
- Prueba del suero para determinar el título específico del antígeno utilizando el extracto de proteína (en HEK293) como antígeno de recubrimiento
- Si el título no es satisfactorio, 1 ó 2 refuerzos más
- Si el título es satisfactorio, se sigue el proceso con el resto de pasos de recogida de líquido de ascitis
Cifras clave :
-Número mínimo de ratones : ...4.....
- Duración del protocolo : 100-140........ días
- Número de inyecciones por animal : 3-5.....
- Cantidad de antígeno por inyección : ...20.... µg/ratón
- Número de tomas de muestras por animal : 1 - 2.....
Servicios relacionados disponibles :
=> Síntesis genética
=> Clonación de genes
=> Síntesis de péptidos/Producción recombinante
=> Producción de otros policlonales
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=> Etiquetado de anticuerpos
=> Purificación de anticuerpos
=> Fragmentación de anticuerpos
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=> Validación de anticuerpos