Interferón alfa-2A

El interferón Alfa-2a (INF Alfa-2a) es un interferón de tipo 1 que consta de 165 residuos de aminoácidos, que es una proteína terapéutica de tamaño medio, se produce tradicionalmente mediante tecnología recombinante. Esta citoquina se utiliza ampliamente por sus propiedades antivirales y antineoplásicas.

1. Síntesis química de proteínas

La química ofrece infinitas posibilidades para producir proteínas a medida. Nuestra tecnología permite construir moléculas átomo a átomo y considerar ajustes precisos del producto. Además, nuestro personal con más de 20 años de experiencia le guía para que tome las mejores decisiones.

 

• Nuestra síntesis

Gracias a nuestra tecnología exclusiva y patentada, hemos ampliado cada vez más los límites de la síntesis química de péptidos. Ahora podemos producir proteínas de tamaño medio que contienen entre 70 y 400 aminoácidos.

 

• Desarrollo de CO

Trabajamos en equipo con nuestros socios desde el principio, diseñando, personalizando y optimizando pistas totalmente activas para su desarrollo preclínico y posterior.

 

• Bio-Betters

Gracias a la evolución de la normativa y a nuestra avanzada tecnología, ahora podemos pensar en medicamentos biosimilares libres de endotoxinas y sin otros contaminantes e impurezas de la producción de ADNr, es decir, biosimilares "limpios" o "biobetales".”

 

Nuestra plataforma de síntesis química tiene como objetivo producir proteínas de tamaño medio con la máxima pureza y homogeneidad, a escala de miligramos, desde la fase inicial de I+D hasta la producción industrial GMP completa a escalas de varios gramos.

 

Basándonos en la conocida tecnología de ligación, hemos desarrollado procesos y enlazadores propios que permiten ensamblar fragmentos peptídicos de forma muy específica, bloque a bloque.

Podemos producir no sólo proteínas nativas, sino también proteínas modificadas con precisión. Un amplio panel de modificaciones son compatibles con nuestras habilidades y tecnologías:

• Fosforilación / Glicosilación / PEGilación
• Etiquetado (fluoróforos, biotina, quenchers)
• Aminoácidos no naturales (D-aminoácidos, etiquetado isotópico N15 y C13...)
• Proteínas de fusión, proteínas cíclicas

 

Al construir esas proteínas a medida, átomo por átomo, garantizamos la localización de cualquier modificación con absoluta precisión. Las proteínas sintetizadas químicamente son intrínsecamente de muy alta calidad y pureza. No tienen isoformas, endotoxinas ni contaminantes biológicos.

Estrategia de síntesis esquemática:

Síntesis de fragmentos lineales de proteínas

• Utilización de la estrategia de síntesis de péptidos en fase sólida (SPPS)
•  Purificación de fragmentos mediante RP-HPLC

Ensamblaje de fragmentos

• Ensamblaje de péptidos lineales mediante nuestra tecnología patentada
• Reacción en una sola olla sin purificación intermedia
• Purificación de la proteína lineal mediante RP-HPLC

 

Ventajas de la síntesis química de proteínas:

• Proteínas con máxima actividad biológica
• Puede evitar los problemas de la producción de proteínas biológicas (toxicidad, pureza, cuerpos de inclusión…)
• Puede ayudar con proteínas complejas que no pueden ser producidas por sistemas biológicos (alta hidrofobicidad, bucle intermenbrana)
• Pureza muy elevada (sin endotoxinas, animales ni productos biológicos)
• Homogeneidad en los preparados (sin isoforma)
• Para proteínas que necesitan aminoácidos no naturales o cadenas laterales finamente controladas.
• Producción automatizada en miligramos y ampliación a escala industrial

2. Síntesis química del INF Alfa-2a

• Estrategia de montaje

Empleamos una estrategia de ensamblaje de 3 fragmentos para garantizar un rendimiento y una pureza óptimos. Los fragmentos se sintetizaron mediante síntesis peptídica en fase sólida clásica con nuestra resina patentada y se purificaron con RP-HPLC.

En el ensamblaje de la proteína lineal se utilizó nuestra tecnología patentada en una reacción de un solo paso, sin purificación intermedia. La purificación de la proteína lineal se realizó mediante RP-HPLC.

 

• Plegado semicontrolado

El ensamblaje Mediante la modificación de la secuencia de la proteína, realizamos un plegamiento muy eficiente en solución, lo que dio lugar a altos rendimientos. Una vez completada la etapa de plegamiento, la liberación de la proteína nativa plegada se realizó mediante tratamiento in situ. La purificación final de la proteína se realizó por métodos PR-HPLC o HIC.

 

• Caracterización final

Para garantizar la pureza óptima y la estructura correcta del interferón alfa-2A, analizamos esta proteína de tamaño medio con los métodos cromatográficos y de espectrometría de masas de alta fiabilidad que hemos desarrollado.

El estricto control de calidad garantizó una pureza superior al 95 % del interferón alfa-2A final.

 

• Caracterización estructural

Se sabe que el interferón Alfa-2A tiene 2 enlaces disulfuro: Cys1-Cys98 y Cys29-Cys138. Demostramos las cisteínas correctas mediante digestión enzimática (tripsina) y análisis por UHPLC/espectrometría de masas de los fragmentos resultantes.

 

 

• Análisis de IFN Aplpha-2A por LC-MS

IFN Aplpha-2A se escindió enzimáticamente

Se determinaron los fragmentos y se confirmaron los enlaces disulfuro correctos

 

• Identificación de fragmentos peptídicos enlazados