La technique de PCR (pour Polymerase Chain Reaction) est largement utilisée en biologie moléculaire. Le principe de la PCR est d'utiliser une enzyme, une polymérase, pour dupliquer en grand nombre une séquence d'ADN ou d'ARN connue à partir d'une petite quantité. Cela se fait par la répétition de cycles de transition de température. En règle générale, chaque cycle se compose de 3 étapes : dénaturation, hybridation et élongation.
Étapes de la PCR
La phase de dénaturation consiste à séparer les 2 brins d'ADN afin de préparer l'étape suivante. L'étape d'hybridation permet aux amorces sens et antisens de s'hybrider aux matrices d'ADN (les 2 brins séparés lors de la dénaturation). Le temps et la température de cette étape varient en fonction de la séquence des amorces. La phase d'élongation permet aux polymérases de synthétiser le brin complémentaire de la matrice d'ADN. Ce nouveau brin est synthétisé à partir des dNTPs libres présents dans le milieu de réaction. La durée de cette étape dépend de la longueur de la séquence à amplifier.
Types de PCR
Il existe désormais différents types de PCR, tels que la PCR classique, la RT-PCR qui permet d'utiliser de l'ARN comme point de départ en utilisant une transcriptase inverse, la PCR quantitative en temps réel ou qPCR qui permet de mesurer la quantité d'ADN polymérisé à chaque cycle (en temps réel) en utilisant un marqueur fluorescent.
