Enzymes pour la culture végétale
Les protoplastes sont des cellules végétales nues sphériques produites par l'élimination de la paroi cellulaire au moyen d'enzymes digestives. Les protoplastes végétaux peuvent être cultivés dans des milieux définis et formeront une nouvelle paroi cellulaire, se diviseront et, dans de nombreux cas, régénéreront des plantes complètes. Les protoplastes constituent un système expérimental unique pour l'étude de la structure et de la fonction des cellules végétales.
La méthode enzymatique est une technique très largement utilisée pour l'isolement des protoplastes. Les avantages de la méthode enzymatique comprennent un bon rendement de cellules viables et des dommages minimes ou nuls aux protoplastes. Les protoplastes peuvent être isolés à partir d'une grande variété de tissus et d'organes, notamment des feuilles, des racines, des apex de pousses, des fruits, des embryons et des microspores.
L'isolement enzymatique des protoplastes peut être réalisé par deux approches :
Méthode en deux étapes ou séquentielle :
Le tissu est d'abord traité avec de la pectinase (macérozyme) pour séparer les cellules en dégradant les lamelles moyennes. Ces cellules libres sont ensuite exposées à la cellulose pour libérer des protoplastes. La pectinase décompose les agrégats cellulaires en cellules individuelles tandis que la cellulose élimine la paroi cellulaire proprement dite.
Méthode en une seule étape ou simultanée :
C'est la méthode préférée pour l'isolation des protoplastes. Elle implique l'utilisation simultanée des deux enzymes - macérozyme et cellulose.
