Production d'anticorps polyclonaux de Souris par immunisation génétique
Cette technique consiste à faire exprimer le gène codant l'antigène d'intérêt directement chez la souris.
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Le plasmide contenant le gène d'intérêt est directement injecté chez l'animal qui va ensuite exprimer la protéine in vivo.
Parmi les cellules transfectées, les Cellules Présentatrices de l'Antigène (CPA) vont présenter la molécule cible aux acteurs de la réponse immunitaire à travers le CMH.
Une partie de ces acteurs, les lymphocytes B, vont ensuite produire des anticorps spécifiques.
Protocole Standard :
- Construction du plasmide d'expression contenant le gène de l'antigène sous contrôle du promoteur CMV
- Transfection de cellules HEK293 avec le plasmide, en parallèle, pour récolter l'extrait protéique
- Injection du plasmide dans les souris à 3 reprises
- Prélèvement des souris au jour
- Test du sérum obtenu sur l'extrait protéique produit par les cellules HEK293 coaté au fond d'une plaque ELISA
- Si le titre obtenu n'est pas satisfaisant, possibilité de faire 1 à 2 boosts
- Si le titre obtenu est satisfaisant, les étapes de récupération de liquides d'ascites sont poursuivies
Chiffres clés :
- Nombre de souris : 4
- Durée de la prestation : 3-5 mois
- Nombre d'injections par animal : 3-5
- Nombre de surnageants par hybridomes : 1-2
- Quantité d'antigène par injection : 20 µg / souris
- Nombre de prélèvements par animaux : 1-2
Prestations complémentaires disponibles :
=> Synthèse de gène
=> Clonage de gène
=> Synthèse de peptide/Production de recombinante
=> Production d'autres anticorps polyclonaux
=> Production d'anticorps monoclonaux
=> Couplage d'anticorps
=> Purification d'anticorps
=> Fragmentation d'anticorps
=> Remodelage d'anticorps
=> Validation d'anticorps