Service à façon: Production de banque d'anticorps monoclonaux
Technologie SEAL pour Surface Epitope Antibody Library permet la génération d'une banque d'anticorps monoclonaux de haute affinité contre une banque d'antigènes réprésentative de la surface d'une protéine.
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Les épitopes linéaires et structuraux de la surface de la protéine sont ciblés.
Une banque SEAL™ typique
- contient 6 à 12 anticorps monoclonaux de forte affinité
- cible 4 à 8 épitopes de surface d'une protéine
- augmente la probabilité d'obtenir des anticorps efficaces comparée aux méthodes traditionnelles dans lesquelles les anticorps ciblent entre 1 et 3 épitopes.
En se basant sur les résultats obtenus avec plus de 100 banques SEAL™ générées pour des protéines membranaires, des facteurs solubles, des facteurs de transcription et des kinases, en moyenne, 2 fois plus d'expériences de WB et d'IP fonctionnent avec les anticorps SEAL™ qu'avec des anticorps générés par des méthodes conventionnelles. Pour les cibles difficiles comme les récepteurs membranaires et les facteurs de transcription, les anticorps SEAL™ sont 3 à 4 fois plus efficaces. Ceci n'est pas surprenant étant donné le nombre d'anticorps indépendants et d'épitopes ciblés grâce à la technologie SEAL™ et pour les protéines de faible abondance, ceci semble être un facteur encore plus important pour la génération d'anticorps efficaces. La production d'une banque d'anticorps SEAL™ a de nombreux avantages comparé à la production d'anticorps monoclonaux ou polyclonaux traditionnelle : temps, prix et, plus important, qualité des anticorps.
Production d'une banque SEAL™
Un modèle exclusif de calcul est utilisé pour identifier des séquences de dix résidus de long qui sont exposés sur la surface de la protéine (antigènes SEAL™). En combinant la prédiction de la structure secondaire, l'analyse phylogénétique et la modélisation structurelle, cette méthode donne avec une précision de 73%(67%de sensibilité et 82%de spécificité) l'identification des épitopes peptidiques linéaires exposés (épitopes SEAL™).
Les gènes synthétiques codant pour les épitopes SEAL sont insérés dans un vecteur ADN contenant les facteurs d'amélioration de l'immunogénicité (Immunogenicity Enhancement Factors ou IEF) et les séquences d'ADN codant pour des protéines recombinantes très immunogènes permettant d'échantillonner la surface de la protéine cible lorsqu'elles sont exprimées par E.Coli.
Les domaines structuraux sont produits sous forme de protéines solubles dans E. Coli ou des cellules de mammifères en parallèle des épitopes SEAL™ linéaires. Un système exclusif d'expression/sécrétion est utilisé pour produire des protéines solubles dans le milieu de culture.
Les souris immunisées avec les immunogènes structuraux vont produire des anticorps qui pourront reconnaitre les épitopes conformationnels des protéines cibles. Ce type d'anticorps est souvent plus efficace pour des applications telles que l'IP, la cytométrie en flux et les études fonctionnelles.
Les souris immunisées avec les antigènes IEF-SEAL™ en utilisant une immunisation optimisée avec une très petite quantité d'antigènes vont développer des réponses immunes de forte affinité en 3 semaines. Les cellules de la rate des souris sacrifiées sont fusionnées avec des cellules SP2/0 et analysées par ELISA compétitif quantitatif pour sélectionner les lignées d'hybridomes qui sécrètent les anticorps spécifiques des éitopes. Les hybridomes sélectionnés sont alors sous-clonés pour établir des lignées cellulaires stables.
Les banques d'anticorps monoclonaux SEAL™ sont conçues pour optimiser les taux de réussite des anticorps pour diverses applications. Il existe 4 types de banques SEAL. Ces produits diffèrent par:
- le nombre et le type (peptides ou protéines) d'antigènes utilisés pour l'immunisation
- le nombre d'épitopes cibles
- le nombre d'anticorps fournis
