Interferone alfa-2A

L'interferone alfa-2a (INF Alfa-2a) è un interferone di tipo 1 composto da 165 residui aminoacidici, una proteina terapeutica di medie dimensioni, prodotta tradizionalmente con tecnologia ricombinante. Questa citochina è ampiamente utilizzata per le sue proprietà antivirali e antineoplastiche.

1. Sintesi chimica delle proteine

La chimica offre infinite possibilità di produrre proteine personalizzate. La nostra tecnologia permette di costruire le molecole atomo per atomo e di prevedere precise regolazioni del prodotto. Inoltre, il nostro personale con oltre 20 anni di esperienza vi guida nelle scelte migliori.

 

• La nostra sintesi

Grazie alla nostra tecnologia unica e proprietaria, abbiamo spinto i limiti della sintesi chimica dei peptidi sempre più in alto. Siamo ora in grado di produrre proteine di medie dimensioni contenenti da 70 a 400 aminoacidi.

 

• Sviluppo CO

Collaboriamo con i nostri partner, fin dall'inizio, lavorando a stretto contatto, progettando, personalizzando e ottimizzando le piste completamente attive per il loro sviluppo pre-clinico e oltre.

 

• Bio-Betters

Grazie all'evoluzione delle normative e alla nostra tecnologia avanzata, oggi possiamo pensare a farmaci biosimilari privi di endotossine e di altri contaminanti e impurità della produzione di rDNA, ovvero biosimilari "puliti" o "Biobetters".

 

La nostra piattaforma di sintesi chimica mira a fornire proteine di medie dimensioni con la massima purezza e omogeneità, su scala milligrammi, dalla fase iniziale di R&S fino alla produzione industriale GMP completa su scala multigrammi.

 

Sulla base della ben nota tecnologia di ligazione, abbiamo sviluppato processi e linker proprietari che consentono di assemblare frammenti peptidici in modo molto specifico, blocco per blocco.

Siamo in grado di produrre non solo proteine native, ma anche proteine modificate con precisione. Un ampio panel di modifiche è compatibile con le nostre competenze e tecnologie:

• Fosforilazione / Glicosilazione / PEGilazione
• Etichettatura (fluorofori, biotina, quenchers)
• Amminoacidi non naturali (D-amminoacidi, etichettatura isotopica N15 e C13...)
• Proteine di fusione, proteine cicliche

 

Costruendo queste proteine personalizzate, atomo per atomo, assicuriamo la localizzazione di qualsiasi modifica con assoluta precisione. Le proteine sintetizzate chimicamente sono intrinsecamente di qualità e purezza molto elevate. Non hanno isoforme, endotossine o contaminanti biologici.

Strategia di sintesi schematica:

Sintesi di frammenti lineari di proteine

• Utilizzando la strategia di sintesi dei peptidi in fase solida (SPPS)
•  Purificazione dei frammenti mediante RP-HPLC

Assemblea dei frammenti

• Utilizzo dell'assemblaggio di peptidi lineari con la nostra tecnologia proprietaria
• Reazione one-pot senza purificazione intermedia
• Purificazione della proteina lineare mediante RP-HPLC

 

Vantaggi della sintesi proteica chimica:

• Proteine con attività biologica massimizzata
• Può aggirare i problemi legati alla produzione di proteine biologiche (tossicità, purezza, corpi inclusi...).
• Può aiutare con proteine complesse che non possono essere prodotte dai sistemi biologici (elevata idrofobicità, loop intermenbrana)
• Purezza molto elevata (senza endotossine, animali e biologici)
• Omogeneità nelle preparazioni (nessuna isoforma)
• Per le proteine che necessitano di aminoacidi non naturali o di catene laterali finemente controllate
• Produzione automatizzata a milligrammi e scale-up su scala industriale

2. Sintesi chimica dell'INF Alfa-2a

• Strategia di assemblaggio

Abbiamo impiegato una strategia di assemblaggio a 3 frammenti per garantire una resa e una purezza ottimizzate. I frammenti sono stati sintetizzati mediante sintesi classica di peptidi in fase solida con la nostra resina proprietaria e purificati con RP-HPLC.

L'assemblaggio della proteina lineare ha utilizzato la nostra tecnologia proprietaria in una reazione one-pot, senza alcuna purificazione intermedia. La purificazione della proteina lineare è stata effettuata mediante RP-HPLC.

 

• Piegatura semicontrollata

L'assemblaggio Utilizzando modifiche alla sequenza della proteina, abbiamo realizzato un ripiegamento altamente efficiente in soluzione, che ha portato a rese elevate. Dopo il completamento della fase di ripiegamento, la liberazione della proteina nativa ripiegata è stata effettuata mediante trattamento in situ. La purificazione finale della proteina è stata eseguita con metodi PR-HPLC o HIC.

 

• Caratterizzazione finale

Per garantire la purezza ottimale e la corretta struttura dell'interferone alfa-2A, abbiamo analizzato questa proteina di medie dimensioni con i metodi cromatografici e di spettrometria di massa altamente affidabili che abbiamo sviluppato.

Il rigoroso controllo di qualità ha garantito una purezza superiore al 95% dell'interferone alfa-2A finale.

 

• Caratterizzazione strutturale

L'interferone alfa-2A è noto per avere 2 legami disolfuro: Cys1-Cys98 e Cys29-Cys138. Abbiamo dimostrato le cisteine corrette mediante digestione enzimatica (tripsina) e analisi UHPLC/spettrometria di massa dei frammenti risultanti.

 

 

• Analisi dell'IFN Aplpha-2A mediante LC-MS

L'IFN Aplpha-2A è stato scisso enzimaticamente

I frammenti sono stati determinati e i legami disolfuro corretti sono stati confermati.

 

• Identificazione del frammento peptidico collegato