Servizio personalizzato: Produzione di librerie di anticorpi monoclonali

Vengono presi di mira sia i peptidi lineari che gli epitopi strutturali sulla superficie delle proteine.

Una tipica biblioteca SEAL

• è costituito da 6-12 anticorpi monoclonali ad alta affinità
• si rivolge in modo specifico a 4-8 epitopi proteici di superficie indipendenti.
• Ciò aumenta notevolmente la possibilità di scoprire anticorpi di successo rispetto ai metodi tradizionali, in cui gli anticorpi mirano solo a 1-3 epitopi contro brevi peptidi o antigeni proteici solubili.

Sulla base dei risultati delle applicazioni di >100 librerie SEAL™ generate per proteine di membrana, fattori solubili, fattori di trascrizione e chinasi, in media si scoprono almeno 2 volte più anticorpi di successo per esperimenti Western e IP da anticorpi SEAL™ rispetto ad anticorpi generati con metodi convenzionali. Per bersagli difficili come i recettori di membrana e i fattori di trascrizione, gli anticorpi SEAL™ hanno una probabilità di successo 3-4 volte superiore. Ciò non sorprende, poiché il numero di anticorpi indipendenti e di epitopi mirati è più volte maggiore negli anticorpi SEAL™ e per le proteine a bassa abbondanza questo sembra essere un fattore ancora più critico per la generazione di anticorpi di successo. La generazione di librerie di anticorpi SEAL? presenta vantaggi significativi rispetto alla generazione tradizionale di anticorpi monoclonali e policlonali in termini di tempo, costi e, soprattutto, qualità degli anticorpi.

Generazione della libreria SEAL

Un modello computazionale proprietario viene utilizzato per identificare tratti di dieci residui esposti sulla superficie delle proteine (antigeni SEAL™). Combinando la previsione della struttura secondaria, l'analisi filogenetica e la modellazione strutturale, questo metodo raggiunge un'accuratezza del 73% (67% di sensibilità e 82% di specificità) nell'identificare gli epitopi peptidici lineari esposti (epitopi SEAL™).



I geni sintetici che codificano gli epitopi multipli di SEAL? sono inseriti in un vettore di DNA proprietario costituito da fattori di potenziamento dell'immunogenicità (IEF, ad esempio epitopi T multipli) e sequenze di DNA che daranno origine a proteine ricombinanti particolate e altamente immunogene che campionano la superficie della proteina target quando vengono espresse in E.Coli.



I domini strutturali sono prodotti come proteine solubili in cellule E.Coli o di mammifero in parallelo agli epitopi SEAL™ lineari. Per produrre proteine solubili nel terreno di coltura si utilizza un sistema di espressione/secrezione batterica proprietario.
I topi immunizzati con immunogeni strutturali produrranno anticorpi che possono riconoscere alcuni epitopi conformazionali dominanti delle proteine bersaglio. Questo tipo di anticorpi è spesso più adatto ad applicazioni come l'IP, la citometria a flusso o gli studi funzionali.



I topi immunizzati con gli antigeni epitopici IEF-SEAL™ mediante un'immunizzazione brevettata e ottimizzata con solo una piccola quantità di antigeni producono risposte immunitarie IgG ad alta affinità entro tre settimane. Le cellule della milza dei topi sacrificati vengono fuse con cellule SP2/0 e sottoposte a screening con ELISA quantitativo competitivo per selezionare le linee cellulari di ibridoma che secernono anticorpi che riconoscono specificamente le sequenze di epitopi con un'affinità almeno nano-molare. Gli ibridomi selezionati sono poi sottoposti a molteplici cicli di sub-clonazione per stabilire linee cellulari stabili.


I prodotti delle librerie di anticorpi monoclonali SEAL™ sono progettati per massimizzare il tasso di successo nello sviluppo di anticorpi funzionanti per diverse applicazioni, e per raggiungere questo obiettivo vengono offerti 4 tipi standard di librerie SEAL. Questi prodotti si differenziano per:

• il numero e il tipo (peptidi o proteine) di antigeni utilizzati per l'immunizzazione
• il numero di epitopi mirati
• il numero di anticorpi consegnati ai clienti

Di seguito sono riportati il confronto tra i prodotti e alcune utili regole di selezione: