Isotype controles zijn cruciale componenten in immunologische assays, vooral in technieken zoals flowcytometrie, immunohistochemie en ELISA. Ze dienen als negatieve controles die onderzoekers helpen om onderscheid te maken tussen specifieke antilichaambinding en niet-specifieke achtergrondsignalen.
Wat zijn isotype controles?
Isotype controles zijn antilichamen die geen specificiteit vertonen voor het doelantigeen dat wordt bestudeerd. Ze zijn overeenkomend met het primaire antilichaam wat betreft klasse, type en gastdiersoort, maar binden niet aan een specifiek antigeen. Het primaire doel is om het niveau van niet-specifieke achtergrondsignalen te meten, veroorzaakt door verschillende factoren zoals:
- Binding aan Fc-receptoren op doelcellen.
- Niet-specifieke interacties met cellulaire eiwitten, koolhydraten of lipiden.
- Cellulaire autofluorescentie, die de detectiemethoden kan verstoren.
Het belang van isotype controles
Het gebruik van isotype controles is essentieel om verschillende redenen:
- Het onderscheid maken tussen specifieke en niet-specifieke binding: Door een basismeting van achtergrondkleuring te bieden, helpen isotype controles om te bepalen of het waargenomen signaal te wijten is aan specifieke antilichaambinding of niet-specifieke interacties.
- Validatie van testresultaten: Ze vergroten de betrouwbaarheid van experimentele resultaten door ervoor te zorgen dat positieve signalen daadwerkelijk afkomstig zijn van het doelantigeen en niet van artefacten.
- Optimalisatie van experimentele omstandigheden: Isotype controles stellen onderzoekers in staat om hun experimentele omstandigheden aan te passen op basis van het waargenomen achtergrondsignaal.
Toepassingen van isotype controles
Hoewel ze voornamelijk in flowcytometrie worden gebruikt, hebben isotype controles bredere toepassingen in verschillende immunologische technieken:
- Flowcytometrie: Ze worden veel gebruikt om achtergrondkleuring te beoordelen en poortstrategieën te optimaliseren.
- Immunohistochemie (IHC): In IHC helpen isotype controles om de specificiteit van de kleuring in weefselmonsters te valideren.
- Western Blotting en ELISA: Deze controles kunnen ook worden gebruikt om een nauwkeurige detectie van eiwitten in complexe mengsels te waarborgen.