Assays op basis van reporter
Reporter-gebaseerde assays zijn biologische assays die gebruikt worden om het regulerend vermogen van een onbekende DNA-sequentie te meten, genregulatie door cis- of transwerkende factoren te bestuderen of de activering van celsignaalroutes te meten.
In deze assays wordt de onbekende promotorsequentie gekoppeld aan een gemakkelijk detecteerbaar reportergen waarvan het product gemakkelijk gedetecteerd en kwantificeerbaar gemeten kan worden. De expressieniveaus van het reportergen worden gecontroleerd door de enzymactiviteit van het reportereiwit te kwantificeren, wat gebruikt wordt om regulerende sequenties, activiteit van de transcriptiefactor, celsignalering of signaalwegen te karakteriseren.
Veel voorkomende reportergenen zijn bèta-galactosidase, luciferase, bèta-lactamase, alkalische fosfatase en GFP (groen fluorescentie-eiwit).
Luciferases worden gebruikt om bioluminescente reporter-assays te maken die zeer kwantitatief zijn, gevoelig over een breed dynamisch bereik en gemakkelijk te detecteren door de lichtopbrengst te meten.
Bij de meeste reportergen-tests is er sprake van één of twee reportergenen, waarbij de tweede reporter wordt uitgedrukt in een "controlevector" om de resultaten van de experimentele reporter te normaliseren.
Het controle reportergen wordt meestal aangestuurd door een constitutieve promoter en de controlevector wordt gecotransfecteerd met de experimentele reporter.
De cellen worden blootgesteld aan verschillende factoren of omstandigheden, waarvan het effect eenvoudig kan worden gevolgd door veranderingen in lichtemissie te meten. Verschillende detectiemethoden zoals luminescentie, absorptie en fluorescentie worden gebruikt om het tot expressie gekomen eiwit van het reportergen te meten.
Reporter assays kunnen ook worden gebruikt om de RNAi-activiteit kwantitatief te beoordelen en modulatoren van RNAi te identificeren. Ze kunnen ook worden gebruikt om chemicaliën te screenen die de androgeensignalering verstoren.
De reportercellen maken gebruik van transiënte transfectie om betrouwbare en nauwkeurige resultaten te garanderen, en de cellen zijn geoptimaliseerd om de beste experimentele omstandigheden te bieden met de reagentia die in de kits worden geleverd, zodat experimenten eenvoudig gestandaardiseerd kunnen worden.
Op reportercellen gebaseerde assaykits bieden een optimale assaygevoeligheid en dynamisch bereik bij het kwantificeren van receptoractiviteit, waardoor ze een betrouwbare en kosteneffectieve screeningdienst vormen voor farmaceutische verbindingen, chemicaliën of milieumonsters.
Resultaat van uw zoeken : 1 product gevonden
Verfijn uw zoekopdracht :
- kit 1
- Assay 1