Reagentia en instrumenten voor immunologie, celbiologie en moleculaire biologie.

Nauwkeurigheid van ELISA's verhogen: De rol van blokkeerbuffers

Verhoog de nauwkeurigheid van uw ELISA met blokkeerbuffers - de sleutel tot ruisonderdrukking, gevoeligheidsverhoging en betrouwbare resultaten bij eiwitdetectie.

/upload/5-rgfeqq.jpg

Inleiding

Enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA) is een veelgebruikte techniek voor het detecteren en kwantificeren van eiwitten, antilichamen en hormonen. De nauwkeurigheid en betrouwbaarheid van ELISA-resultaten worden aanzienlijk beïnvloed door de keuze van blokkeringsbuffers, die niet-specifieke bindingen voorkomen en de achtergrondruis verminderen.

Blokkeringsbuffers zijn essentieel voor het voorkomen van niet-specifieke interacties tussen antilichamen en het microplaatafschrift. Niet-specifieke bindingen kunnen leiden tot verhoogde achtergrondsignalen, wat resulteert in valse positieven of onjuiste kwantificering van doel-analyten. De primaire functie van een blokkeringsbuffer is om onbezette bindingsplaatsen op de plaat af te dekken, waardoor de achtergrondruis wordt verminderd en de signaal-ruisverhouding van de test wordt verbeterd (Huber et al., 2009).

Werkingsmechanisme

Het primaire mechanisme waarmee blokkeringsbuffers werken, is door het verzadigen van onbezette bindingsplaatsen op de vaste fase (bijv. microplaatholtes). Na de immobilisatie van vang-antilichamen of antigenen blijven vrije bindingsplaatsen beschikbaar voor niet-specifieke interacties. Blokkeringsbuffers bezetten deze plaatsen en voorkomen zo dat andere eiwitten of antilichamen niet-specifiek binden.

Blokkeringsbuffers voorkomen niet alleen niet-specifieke binding, maar stabiliseren ook biomoleculen die aan het holteoppervlak zijn gebonden. Deze stabilisatie is cruciaal om de integriteit en functionaliteit van de geïmmobiliseerde eiwitten tijdens de daaropvolgende teststappen te behouden. Onderzoek heeft aangetoond dat blokkeringsmiddelen conformationele veranderingen in geïmmobiliseerde eiwitten kunnen verminderen, waardoor hun activiteit behouden blijft en nauwkeurige detectie wordt gegarandeerd (Xiao et al., 2012).

Voordelen van het gebruik van blokkeringsbuffers in ELISA

Verbeterde gevoeligheid		Vermindering van niet-specifieke binding

Stabilisatie van geadsorbeerde eiwitten		Verminderde kruisreactiviteit

Het gebruik van effectieve blokkeringsbuffers in ELISA-protocollen biedt tal van voordelen, waaronder verminderde niet-specifieke binding, verhoogde gevoeligheid, eiwitstabilisatie, flexibiliteit bij verschillende assayformaten, verminderde sterische belemmering, verminderde kruisreactiviteit en verbeterde reproduceerbaarheid. Een breed assortiment blokkeringsbuffers wordt aangeboden om ELISA-werkstromen te ondersteunen, waarbij optimale prestaties, verminderde achtergrondinterferentie en betrouwbare resultaten worden gegarandeerd.

Referenties

Huber, D., Rudolf, J., Ansari, P., Galler, B., Führer, M., Hasenhindl, C. en Baumgartner, S., 2009. Effectiviteit van natuurlijke en synthetische blokkeringsreagentia en hun toepassing bij het detecteren van voedselallergenen in enzymgekoppelde immunosorbenttests. Analytical and bioanalytical chemistry, 394, pp.539-548.

Xiao, Y., en Isaacs, S.N., 2012. Enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA) en blokkeren met runderserumalbumine (BSA) — niet alle BSA's zijn hetzelfde. Journal of immunological methods, 384(1-2), pp.148-151.