Service op maat: Productie van monoklonale antilichaambibliotheek

 

Zowel lineaire peptiden als structurele epitopen op het eiwitoppervlak zijn het doelwit.

Een typische SEAL™ bibliotheek

• bestaat uit 6-12 monoklonale antilichamen met hoge affiniteit
• richten zich specifiek op 4-8 onafhankelijke epitopen van het eiwitoppervlak.
• Dit vergroot de kans om succesvolle antilichamen te ontdekken aanzienlijk in vergelijking met traditionele methoden waarbij antilichamen zich alleen richten op 1-3 epitopen tegen korte peptiden of oplosbare eiwitantigenen.

Gebaseerd op toepassingsresultaten van >100 SEAL™ bibliotheken gegenereerd voor membraaneiwitten, oplosbare factoren, transcriptiefactoren en kinases, worden gemiddeld minstens 2 keer meer succesvolle antilichamen voor Western en IP experimenten ontdekt van SEAL™ antilichamen dan van antilichamen gegenereerd met conventionele methoden. Voor moeilijke targets zoals membraanreceptoren en transcriptiefactoren hebben SEAL™-antilichamen 3-4 keer meer kans om succesvol te zijn. Dit is niet verrassend omdat het aantal onafhankelijke antilichamen en doelwit epitopen meerdere malen groter is in SEAL? antilichamen en voor eiwitten met een lage abundantie lijkt dit een nog kritischere factor te zijn voor het genereren van succesvolle antilichamen. Het genereren van SEAL? antilichaambibliotheken heeft aanzienlijke voordelen ten opzichte van het genereren van traditionele monoklonale en polyklonale antilichamen in tijd, kosten en, het belangrijkste, de kwaliteit van antilichamen.

SEAL™ bibliotheek generatie

Een eigen computermodel wordt gebruikt om tien-residulange stukken te identificeren die blootgesteld zijn aan het eiwitoppervlak (SEAL™-antigenen). Door secundaire structuurvoorspelling, fylogenetische analyse en structurele modellering te combineren, bereikt deze methode een nauwkeurigheid van 73% (67% gevoeligheid en 82% specificiteit) bij het identificeren van blootliggende lineaire peptide-epitopen (SEAL™-epitopen).



Synthetische genen die coderen voor meerdere SEAL? epitopen worden ingevoegd in een eigen DNA-vector die bestaat uit Immunogenicity Enhancement Factors (IEF, bijvoorbeeld meerdere T-epitopen) en DNA-sequenties die resulteren in deeltjesvormige, zeer immunogene recombinante eiwitten die het oppervlak van het doeleiwit bemonsteren wanneer ze tot expressie worden gebracht in E.Coli.



Structurele domeinen worden geproduceerd als oplosbare eiwitten in E.Coli of zoogdiercellen, parallel aan lineaire SEAL™ epitopen. Een eigen bacterieel expressie/secretie systeem wordt gebruikt om oplosbare eiwitten in het kweekmedium te produceren.
Muizen die geïmmuniseerd worden met structurele immunogenen produceren antilichamen die een paar dominante conformatie-epitopen van de doeleiwitten herkennen. Dit type antilichaam is vaak succesvoller voor toepassingen zoals IP, flowcytometrie of functionele studies.



Muizen die geïmmuniseerd worden met IEF-SEAL™ epitoopantigenen met behulp van een gepatenteerde, geoptimaliseerde immunisatie met slechts een kleine hoeveelheid antigenen, produceren binnen drie weken IgG-immuunresponsen met hoge affiniteit. Miltcellen van de geofferde muizen worden gefuseerd met SP2/0 cellen en gescreend met kwantitatieve competitieve ELISA om hybridoma cellijnen te selecteren die antilichamen afscheiden die specifiek epitoopsequenties herkennen met ten minste nano molaire affiniteit. Geselecteerde hybridomen worden vervolgens onderworpen aan meerdere subkloneringsrondes om stabiele cellijnen te creëren.


SEAL™ monoklonale antilichaambibliotheekproducten zijn ontworpen om het succespercentage bij de ontwikkeling van werkende antilichamen voor diverse toepassingen te maximaliseren en om dit te bereiken worden 4 standaardtypes SEAL-bibliotheken aangeboden. Deze producten verschillen in:
 

• het aantal en type (peptiden of eiwitten) antigenen dat voor immunisatie wordt gebruikt
• het aantal epitopen waarop wordt gemikt
• het aantal antilichamen geleverd aan klanten

De productvergelijking en een paar handige selectieregels staan hieronder: