Productie van monoklonalen in muizen na genetische immunisatie
Deze techniek maakt het mogelijk om de muis in vivo het gen te laten uitdrukken dat codeert voor het antigeen van interesse
Het gen bevattende plasmide wordt direct geïnjecteerd in muizen die op die manier het geïnteresseerde antigeen in vivo tot expressie zullen brengen. Le plasmide contenant le gène d'intérêt est directement injecté chez l'animal qui va ensuite exprimer la protéine in vivo.
Van de getransfecteerde cellen zullen de antigeenpresenterende cellen (APC) de gerichte moleculen via MHC aan de actoren van de immuunrespons tonen.
Een deel van deze actoren, B-cellen, produceert specifieke antilichamen.
Standaardprotocol :
- Bouw van de DNA-expressievectorplasmide met een CMV-promotor en versterkers die het antigeen ORF bevatten
- Transfectie van HEK293-cellen met plasmide DNA en bereiding van antigeenextract
- Injectie van plasmide DNA in muizen 3 keer
- Muizen laten bloeden
- Testen van sera op antigeenspecifieke titer met gebruik van eiwitextract (in HEK293) als coatingantigeen
- Als titer niet voldoende is, 1 of 2 andere boosts
- Als de titer voldoende is, wordt de rest van de hybridoma-ontwikkeling gevolgd
Belangrijke nummers :
- Minimaal aantal muizen : ...4.....
- Lengte protocol : 100-140........ dagen
- Aantal injecties per dier : 3-5.....
- Hoeveelheid antigeen per injectie : ...20.... µg/muis
- Aantal monsterverzamelingen per dier : 1 - 2.....
Aanverwante diensten beschikbaar :
=> Gen synthese
=> Klonen van genen
=> Peptidesynthese/recombinatieproductie
=> Productie van polyklonen
=> Productie van andere monoklonalen
=> Antilichaam labeling
=> Zuivering van antilichamen
=> Fragmentatie van antilichamen
=> Opvouwen van antilichamen
=> Validatie van antilichamen