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Aumentar a exatidão do ELISA: O papel dos tampões de bloqueio

Aumente a precisão do seu ELISA com tampões de bloqueio - a chave para reduzir o ruído, aumentar a sensibilidade e garantir resultados fiáveis na deteção de proteínas.

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Introdução

Ensaio imunoenzimático (ELISA) é uma técnica amplamente utilizada para detectar e quantificar proteínas, anticorpos e hormônios. A precisão e confiabilidade dos resultados do ELISA são significativamente influenciadas pela escolha dos buffers de bloqueio, que previnem a ligação não específica e reduzem o ruído de fundo.

Buffers de bloqueio são essenciais para prevenir interações não específicas entre anticorpos e a superfície da microplaca. A ligação não específica pode levar a sinais de fundo elevados, resultando em falsos positivos ou quantificação imprecisa dos analitos-alvo. O papel principal de um buffer de bloqueio é cobrir os locais de ligação não ocupados na placa, reduzindo assim o ruído de fundo e melhorando a relação sinal-ruído do ensaio (Huber et al., 2009).

Mecanismo de Ação

O mecanismo primário pelo qual os buffers de bloqueio funcionam é através da saturação dos locais de ligação não ocupados na fase sólida (por exemplo, os poços da microplaca). Após a imobilização de anticorpos ou antígenos de captura, locais de ligação livres permanecem disponíveis para interações não específicas. Os buffers de bloqueio ocupam esses locais, impedindo que outras proteínas ou anticorpos se liguem de forma não específica.

Além de prevenir a ligação não específica, os buffers de bloqueio também estabilizam as biomoléculas ligadas à superfície do poço. Essa estabilização é crucial para manter a integridade e funcionalidade das proteínas imobilizadas durante as etapas subsequentes do ensaio. Pesquisas mostraram que os agentes de bloqueio podem reduzir alterações conformacionais nas proteínas imobilizadas, preservando sua atividade e garantindo uma detecção precisa (Xiao et al., 2012).

Vantagens do Uso de Buffers de Bloqueio no ELISA

Maior Sensibilidade		Redução da Ligação Não Específica

Estabilização das Proteínas Adsorvidas		Redução da Reatividade Cruzada

O uso de buffers de bloqueio eficazes nos protocolos de ELISA oferece inúmeras vantagens, incluindo redução da ligação não específica, maior sensibilidade, estabilização de proteínas, flexibilidade em diferentes formatos de ensaio, minimização de impedimentos estéricos, redução da reatividade cruzada e melhoria na reprodutibilidade. Uma gama completa de buffers de bloqueio é oferecida para apoiar fluxos de trabalho do ELISA, garantindo desempenho ideal, redução da interferência de fundo e resultados confiáveis.

Referências

Huber, D., Rudolf, J., Ansari, P., Galler, B., Führer, M., Hasenhindl, C., e Baumgartner, S., 2009. Eficácia de reagentes de bloqueio naturais e sintéticos e sua aplicação para detectar alérgenos alimentares em ensaios imunoenzimáticos. Analytical and Bioanalytical Chemistry, 394, p. 539-548.

Xiao, Y., e Isaacs, S.N., 2012. Ensaio imunoenzimático (ELISA) e bloqueio com albumina de soro bovino (BSA)—nem todas as BSAs são iguais. Journal of Immunological Methods, 384(1-2), p. 148-151.